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绣球菌母种的制作技术
作者:    来源:    点击数:   更新时间:2015年10月28日 【字体:

绣球菌母种的制作技术

  母种是指经规范方法选育后而获得的,具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物,以玻璃试管为培养容器和使用单位,通常又称为一级种或者试管种。
  关于绣球菌原始母种的来源,在有条件的地方可以从子实体上自行提取,但是由于制作过程要求严谨,难度较高,所以一般的生产单位都是从国家认可的研究单位购买而来的。买回后直接进行母种的扩繁就可以,首先,来看一下母种培养基的制作。
  母种培养基的制作
  制作母种培养基时所采用的配方为:复合糖蛋白30g,蛋白胨1g,大豆粉1g,KH2PO4(磷酸二氢钾)1g,琼脂粉20g,水1000ml。上面的材料都准备好以后,就可以制作了。
  将准备好的培养基配方依次倒入锅内,琼脂粉先不要放入,边加热边搅拌,等到沸腾的时候再加入琼脂粉,并不断搅拌,直到琼脂粉完全融化,然后再将煮好的培养基倒入塑料杯内,这时需要注意的是,如果体积不足1000ml还要加水补足。
  试管分装
  整理好以后,要趁热将培养基倒入固定在铁架台上的漏斗内,用量筒量取10ml的蒸馏水,倒入一支空试管内,做分装试管的对照。将漏斗软管下端的玻璃管插入试管口约3厘米深处,用右手捏紧橡胶软管的止水夹,使培养基缓缓流入空试管内,直到液面与蒸馏水的液面持平为止,然后,松开止水夹让培养基停止流入,并将试管下移离开软管。接下来,依次重复,直到将培养基全部分装到试管内,分装试管时需要注意的是,动作要迅速连贯,以防止培养基在漏斗内凝固。分装完成后,每支试管都要用硅胶塞住。接下来还要将试管进行扎捆。
  试管包扎
  一般情况下,每7支试管作为一扎,先用橡皮筋将试管下端扎紧,再用牛皮纸将试管口处进行包裹,并用橡皮筋进行困扎。下面就要进行灭菌的工作了。
  培养基灭菌
  将包扎好的培养基试管垂直放入灭菌框内,再将灭菌框放入灭菌锅内,在120摄氏度的高温下进行灭菌30分钟。待灭菌锅温度降至60摄氏度左右时,要及时取出试管,并将它们摆放成斜面。
  摆放斜面
  斜面的长度以试管长度的1/2—2/3为好,当试管内培养基完全凝固后才可以将试管收起,制作好的母种培养基应放置在阴凉、通风、干燥处保存,留作备用。上面的工作都完成以后,还要进行母种的接种工作。
  母种接种
  转管过程
  母种接种是将菌种接入试管斜面的过程。在完全无菌的接种箱、接种室或超净工作台上进行。首先,将制备好的母种培养基,待转母种,酒精灯,打火机,接种钩,酒精棉球等放到超净工作台上,打开紫外灯,在低速通风的环境下灭菌30分钟,然后关闭紫外灯,并将风速调节为中速,通风5分钟后再打开日光灯。
  接种时,先点燃酒精灯,用酒精棉球将双手进行擦拭消毒,消毒完成后,用左手握住母种和斜面培养基试管各一支,注意,斜面要向上,同时还要使它们处于水平的位置。右手拿住接种钩,在火焰外焰上反复灼烧,直到接种钩最前端变为红色为止,接下来,拔掉两个试管的胶塞,将灼烧过的接种钩伸入母种试管内,将母种表层菌丝连同培养基挖取少许,送入待接试管内斜面的中间部位,抽出接种钩后,要灼烧管口,然后再塞上胶塞。当所有的试管全部转接完成后,就可以进行培养了。
  培养
  首先,要将试管重新捆扎,并记录好接种时间,将接种后的试管放入25摄氏度的恒温培养箱中,培养15天左右菌丝即可长满。
  菌种质量的检查
  正常的母种菌丝体洁白、健壮、浓密、均匀、绒毛状、生长整齐、菌落舒展、边缘整齐,无色素,无肉眼可看到的污染物。均匀的分布在试管斜壁上。反之,菌丝体洁白、暗淡、稀疏、生长不整齐,菌落紧皱,边缘不整齐,有黄色分泌、培养基内有色斑沉淀,有肉眼可观察到的污染物,试管有破裂等均为劣质种。母种制作完成以后就要进入原种的制作阶段了。

  常用计量单位符号 1、时间:d(天)、h(小时)、min(分)、s(秒)。 2、长度:km(千米)、m(米)、cm(厘米)、mm(毫米)。 3、面积:m2(平方米)、667m2(亩)、hm2(公顷)。 4、体积:m3(立方米)、L(升)、ml(毫升)、μl(微升)。 5、质量:t(吨)、kg(公斤 千克)、g(克)、mg(毫克)、μg(微克)。 6、浓度:mg/L、mg/kg(ppm,1×10-6)。

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Tags:Letou菌 菌种制作

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